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中臺科技大學 生物科技研究所 李憲明所指導 陳怡蓁的 利用隔絕式等溫聚合酶鏈鎖反應原理發展專一檢測錦鯉疱疹病毒之方法 （2013），提出Isothermal amplifica關鍵因素是什麼，來自於錦鯉疱疹病毒、隔絕式恆溫聚合酶鏈鎖反應、主要外殼蛋白。
利用隔絕式等溫聚合酶鏈鎖反應原理發展專一檢測錦鯉疱疹病毒之方法
為了解決Isothermal amplifica 的問題，作者陳怡蓁 這樣論述：
錦鯉疱疹病毒（koi herpesvirus；KHV）也被稱為第三型鯉魚疱疹病毒（Cyprinid herpesvirus 3；CyHV3），被歸類於 Alloherpesviridae 科。錦鯉皰疹病毒感染錦鯉（Cyprinus carpio koi）和鯉魚（Cyprinus carpio carpio）導致高度死亡率，已產生嚴重的經濟損失。由於現有的分子檢測法（如 PCR）所需設備及試劑昂貴，且需要專業人員執行，因此對養殖業者較難執行現場診斷。本研究使用新型的單一溫度熱源—隔絕式恆溫聚合酶鏈鎖反應（insulated isothermal PCR；iiPCR）建立 KHV iiP
CR 檢測法。根據在不同種的 KHV 中具有高度保守性的主要外殼蛋白（major capsid protein；MCP）設計篩選專一性引子及 TaqMan 探針。KHV iiPCR 使用 KHVCPf1/r1 引子組在 1:1 比例混合時敏感度最佳，102 拷倍數 DNA 標準品的檢出率為 100%（11/11）。KHV iiPCR 產物 67 bp 定序序列與 GenBank AY939864 序列比對證實為KHV DNA。優化的KHV iiPCR 偵測 KHV 陽性鯉魚檢體的檢測限度相似於即時定量 PCR，CyHV1 及 CyHV2 DNA 則無訊號產生，且不受魚基因體 DNA 所干擾，能
夠專一擴大出 KHV DNA 訊號。與即時定量 PCR 同時比較，63 件田間檢體中，2 個方法同樣可偵測到 49 件 KHV 陽性及 14 件 KHV 陰性檢體。此系統應可作為一種簡單、迅速、低成本的現場診斷工具，使養殖魚場於進行 KHV 的專一檢測成為可能。