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國立臺灣大學 植物病理與微生物學研究所 沈偉強所指導 呂佳政的 MET5同源基因為隱球菌生長、有性生殖及致病性所必須 （2008），提出kozel啤酒關鍵因素是什麼，來自於硫酸鹽同化途徑、隱球菌、MET5、半胱胺酸、甲硫胺酸、啤酒酵母菌。
MET5同源基因為隱球菌生長、有性生殖及致病性所必須
為了解決kozel啤酒 的問題，作者呂佳政 這樣論述：
常見的含硫胺基酸包括半胱胺酸（cysteine）與甲硫胺酸（methionine），此二者對於生物細胞的正常生理活動有重要貢獻。硫酸鹽同化途徑（sulfateassimilation pathway，SAP），包含有一系列的還原步驟，將無機氧化態硫素進行同化，並合成含硫胺基酸。在真菌界的各物種中，SAP 的主要步驟相當類似，參與其中基因的蛋白質序列，也有很高的保守性。以啤酒酵母菌（Saccharomycescerevisiae）為例，環境中的硫酸鹽類被 Sul1p 與 Sul2p（sulfate transporter）運送至細胞內，經 Met3p（ATP sulfurylase）催化成 5
’-adenylylsulfate（APS）。接著，經 Met14p（APS kinase）作用，加上一個磷酸根，後成為 3’-phospho-5’-adenylylsulfate （ PAPS ） ， 再經 Met16p （ PAPS reductase ） 轉為亞硫酸鹽（sulfite）。最後，由 Met10p 與 Met5p（sulfite reductase α and β subunit）組成的酵素複合體，將亞硫酸鹽還原成負二價硫離子（sulfide），硫離子即可繼續作為合成含硫胺基酸或其他含硫化合物之用。本研究之目的，為探討 MET5 基因於隱球菌之生理角色，首先利用 in vit
ro transposition 反應製備得突變載體，再以基因槍轉殖技術，將其送入隱球菌野生菌株內。經南方雜合分析及細胞內硫離子含量測定，確認隱球菌 met5 突變株。met5 突變株造成半胱胺酸營養缺陷型、生長速率緩慢、生殖菌絲減少、無黑色素形成，以及於替代性昆蟲宿主體內之致病力大幅下降等情形。上述 met5 突變株的缺陷，在重新轉殖 MET5 基因至突變株後，回復至野生株之性狀。本研究之結果與前人研究一致，證實硫酸鹽同化途徑，對於隱球菌的生理作用有極大重要性，後續之深入研究，有潛力發展出抗真菌藥劑之可能標的。